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La vidéo a une durée de 00:15:00 secondes, un titre de Conceptos básicos de la técnica ELISA. Protocolo del ELISA en Sandwich. et est présentée par [vid_author_name]. Voici la description correspondante :« Plus d’informations: http://www.wesapiens.org/es/file/586445240195072/conceptos+b%C3%A1Sicos+De+La+t%C3%A9Cnica+elisa.+Procol+Del+elis+en+Sandwich ».
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Il faut privilégier une société de production adaptée.
La sélection de la société de production appropriée pour votre projet est souvent un défi considérable. Voici quelques indications pour vous orienter vers le bon choix.
Évaluer les compétences des agences et leur expertise
Avant de se prononcer, il est crucial d’examiner l’expertise de la société de production. Certaines entreprises se focalisent sur des productions de cinéma à gros budget, tandis que d’autres peuvent mieux convenir à des projets vidéo plus petits ou à des films d’entreprise. Pour gérer votre projet, évaluez le portefeuille de l’agence et assurez-vous qu’elle a l’expérience nécessaire.
Déterminer les besoins uniques du client.
Il est impératif que la société de production que vous engagez soit capable de répondre à vos besoins spécifiques, chaque projet étant unique. Si vous êtes responsable marketing dans une entreprise et que vous avez besoin de contenu vidéo pour promouvoir votre marque, assurez-vous que la société de production possède une expertise dans la création de vidéos corporates et qu’elle comprend vos objectifs de communication.
Dans le domaine audiovisuel, les tendances actuelles se dessinent clairement.
En réponse aux attentes du public, les formats et contenus se transforment.
La diversification des plateformes de contenu, telles que YouTube et Spotify, a également suscité un intérêt pour des formats plus courts et plus dynamiques. Les acheteurs veulent un contenu qui soit authentique, créatif et engageant. Une société de production expérimentée saura s’ajuster aux attentes du public et aux tendances du marché en modifiant les formats et les contenus.
Les innovations technologiques et leur effet sur l’industrie
En redéfinissant le paysage de la production, des technologies comme la réalité virtuelle (VR), la réalité augmentée (AR) et l’intelligence artificielle (IA) jouent un rôle clé. Ces progrès offrent aux entreprises de production la capacité de fournir des expériences plus immersives et interactives. Pour garantir des solutions modernes et engageantes, il est impératif qu’une société de production soit à la pointe des technologies.
En constante évolution, le secteur audiovisuel est impacté par l’émergence de nouvelles technologies et la modification des attentes des consommateurs.
Comment faire le bon choix de société de production vidéo et audiovisuelle pour vos projets
Grâce à l’évolution technique et à l’émergence de nouveaux médias de diffusion, le secteur de la production a beaucoup changé ces dernières années. De nombreuses entreprises de production, comme e-mediaprod, mettent en avant des solutions complètes où il suffit au client de donner son brief pour obtenir le produit final. Cette approche garantit un gain de temps et une efficacité optimisée, en réponse aux exigences croissantes du marché. En matière de web, e-mediaprod a su adapter ses compétences aux évolutions des formats numériques et des plateformes de diffusion en ligne. Forte d’une équipe d’experts et d’un studio à la pointe des technologies de motion, cette entreprise s’engage à offrir des productions de qualité, que ce soit en France ou à l’international. En se référant aux meilleures pratiques d’Entertainment et en s’inspirant des photos de référence aux États-Unis, elle parvient à insuffler une atmosphère unique à chaque production, tout en respectant les normes de l’industrie.
En guise de conclusion
Garantir le succès de vos projets audiovisuels nécessite de choisir une société de production adéquate. En vous renseignant sur les missions et les étapes de la production, vous serez mieux préparé à choisir l’agence qui correspond à vos attentes. Pour un projet cinématographique, une vidéo pour votre société, ou un documentaire, il est essentiel de trouver une entreprise qui offre un service global, de la préproduction à la postproduction, et qui s’adapte aux tendances actuelles du domaine.
Ne sous-estimez jamais l’impact de cette décision. Consacrez du temps à examiner les agences, à évaluer leurs compétences, et à vous assurer qu’elles saisissent vos objectifs. En choisissant la bonne société de production, vous assurerez la réussite de votre projet audiovisuel.
Spécialiste des productions pour le web et le cinéma, e-mediaprod met à profit ses compétences techniques et créatives pour offrir des projets audiovisuels adaptés aux nouvelles tendances. Pour découvrir leur travail, visitez notre site.
Il est fondamental de saisir la fonction d’une société de production
Identifier les missions et les objectifs.
Les tâches d’une société de production varient en fonction du projet, mais elles englobent généralement la gestion du financement, la planification des ressources, et la coordination des équipes artistiques et techniques. Selon le type de projet (film, documentaire, publicité, ou contenu institutionnel), la société de production se chargera de tous les aspects de la création.
La gestion de projets vidéos, de films et d’autres contenus multimédias est assurée par une société de production, qui joue un rôle fondamental dans le secteur de la production audiovisuelle. Ces entreprises ont pour but de fournir un service exhaustif qui inclut toutes les étapes de la production audiovisuelle, de la conception à la diffusion du produit final.
Examiner les catégories de production (film, vidéo, documentaire)
Souvent, les entreprises de production se spécialisent dans certains genres de films ou de vidéos. Les productions cinématographiques de grande envergure, des projets de documentaires, ou encore des vidéos corporates à vocation marketing peuvent être des domaines d’intérêt pour elles. Chaque type de projet requiert une méthode distincte, et les expertises particulières de l’agence de production sont essentielles pour assurer le succès de la mission.
Les phases essentielles de la création audiovisuelle.
Gestion et organisation des équipes de tournage
Il est souvent admis que le tournage constitue l’étape la plus exaltante d’un projet audiovisuel. Une coordination efficace est essentielle, depuis la gestion des lieux de tournage jusqu’à l’organisation des équipes. Une bonne société de production s’assurera que le matériel, les autorisations de tournage et l’encadrement des équipes sont gérés, afin de garantir un déroulement sans heurts.
Organisation du projet et préparation
La phase de préproduction est déterminante, car elle façonne l’ensemble du projet. Ce projet comprend la définition des objectifs, la rédaction des scripts, le choix des lieux de tournage, et la constitution des équipes techniques et créatives. Une société de production professionnelle saura gérer cette étape avec précision et efficacité, assurant un lancement sans accroc.
Pour une évaluation précise d’une société de production, il est crucial de comprendre les étapes de la production. Voici un aperçu des étapes à considérer :
Édition et finalisation du contenu : post-production
C’est durant la postproduction que la magie prend forme. Pour animer le contenu final, le montage, l’étalonnage, le mixage audio et les effets spéciaux sont nécessaires. La société de production s’assurera que le produit final est d’une qualité exceptionnelle, en tenant compte des exigences du client.
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#Conceptos #básicos #técnica #ELISA #Protocolo #del #ELISA #Sandwich
Retranscription des paroles de la vidéo: [Música] Soy Elena González Rey trabajo en el instituto de parasitología y biomedicina López neira que se encuentra en el parque tecnológico el campus de la salud de granada y mi área de especialidad yo trabajo en el campo de la inmunología y en concreto en en el campo de la neuroinmunología en este vídeo os voy a hablar sobre la técnica Elisa que son las siglas en inglés del en immuno absorbent ass o en español ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima que es una técnica bioquímica que nos permite cuantificar e identificar eh determinadas moléculas sustancias como proteínas hormonas factores de crecimiento en distinto tipo de soluciones como puede ser en sangre en orina en extractos de tejidos Incluso en en cultivos celulares Esta técnica eh se desarrolla en los años 70 principalmente para sustituir a otras técnicas tóxicas que utilizaban radioactividad es una técnica ampliamente utizar inmunología principalmente cuando queremos identificar o detectar un determinado eh elemento que produce una infección si esa infección es bacteriana o es vírica por ejemplo se utiliza para saber qué tipo de infección con el virus del SIDA se tiene o para detectar la ausencia o presencia de una determinada hormona Pues bien la base de Esta técnica consiste en eh que la solución en la que tenemos eh la molécula problema eh vamos a eh vamos a intentar eh inmovilizarla en una superficie en un sustrato en una placa esta placa tiene un material que es poliestireno y lo que vamos a hacer es detectarla con otras moléculas moléculas que son específicas de esta molécula problema la molécula problema la vamos a llamar antígeno y la molécula que detecta sería el anticuerpo los anticuerpos eh van a reconocer determinadas eh estructuras dentro del antígeno hay dos tipos fundamentales de anticuerpos anticuerpos monoclonales que reconocen una sola estructura o epítopo dentro de del antígeno y hay otros anticuerpos que son policlonales los anticuerpos policlonales son una mezcla de anticuerpos que son capaces de reconocer diferentes estructuras o epítopos dentro del mismo antígeno existen cuatro tipos fundamentales de Elisa que son el Elisa un Elisa directo un Elisa indirecto un Elisa eh tipo sándwich y Elisa competitivo los más utilizados en la actualidad son el tipo indirecto y el tipo sándwich en el Elisa directo lo que hacemos Es esta placa de poliestireno la cubrimos con la solución del antígeno y utilizamos el anticuerpo eh para detectar el antígeno normalmente los anticuerpos van a ir Unidos a unas enzimas porque es una reacción enzimática y posteriormente le vamos a Añadir un sustrato que tiene un color cuando la enzima reacciona con el sustrato el color cambia el color del sustrato y nos da un color diferente que puede ser detectado mediante una determinada longitud de onda por un aparato que es el espectr fotómetro Cuanto más cantidad Cuanto más intensidad de color tenemos significa que tenemos más antígeno en la muestra y lo que hacemos Es utilizando una curva patrón estándar en la cual tenemos cantidades conocidas de nuestro antígeno saber a través del color Qué cantidad tendríamos de antígeno en nuestra muestra así en el Elisa directo es un método rápido y sencillo Porque la unión de la enzima va directa eh va directamente Unido al anticuerpo en el ensayo indirecto de nuevo e la placa utilizaremos la solución para cubrir eh los distintos pocillos con nuestra mezcla de antígenos y la utilización utilizaremos un primer anticuerpo que va a detectar el antígeno de manera específica y un segundo anticuerpo que es el que lleva la enzima este segundo anticuerpo se unirá al primer anticuerpo va a reconocer al primer anticuerpo no al antígeno posteriormente añadiremos el sustrato y la enzima eh del segundo anticuerpo desarrollará un color la intensidad de color será directamente proporcional a la cantidad de antígeno que teníamos en la muestra este método tiene la ventaja de que es más sensible que el método directo luego T íamos un ensayo en sándwich un Elisa sándwich en el Elisa en sándwich lo que hacemos Es tapizar la placa no con el antígeno sino con un primer anticuerpo a continuación después de realizar los lavados oportunos utilizamos la mezcla de la solución en la que queremos detectar el antígeno con lo cual el antígeno va a quedar inmovilizado a través de la unión al primer anticuerpo que a su vez se encuentra unido a la placa a continuación también después de lavar el exceso de solución O de antígeno que no se ha pegado utilizaremos un segundo anticuerpo que se va a unir directamente también al antígeno de tal manera que tendríamos el antígeno Unido por un lado por el primer anticuerpo que está pegado a la placa y por el segundo anticuerpo este segundo anticuerpo es el que tiene la enzima y cuando añadimos el sustrato es el que va a desarrollar el color este método es mucho más específico Además de que tiene también una alta sensibilidad y hay una amplificación también muy importante de la señal a detectar Por último el helisa competitivo es un helisa que se utiliza mucho también cuando la estructura del antígeno es complicada Y tenemos epítopos o eh zonas del an que son difíciles de detectar y también cuando tenemos muy muy poca cantidad de este antígeno lo que hacemos en este caso es que la placa se tapiza o se cubre con una cantidad conocida de antígeno y nosotros utilizamos la solución con nuestro antígeno problema cuando añadimos el primer anticuerpo la el anticuerpo se va a poder unir o al antígeno que está en la placa o al antígeno que está en solución como posteriormente vamos a lavar todo el antígeno que se una todo el anticuerpo que se una al antígeno que está en solución será eliminado de la placa de tal manera que cuando se desarrolle el color Cuanto más color tenga es decir Cuanto más anticuerpo se haya Unido al antígeno de la placa significa que tenía menos antígeno en solución es decir tenía menos antígeno En mi en mi muestra problema cuanto menos color tenga significa que más anticuerpo se unió al antígeno que estaba en solución por lo tanto menos se unió al que estaba en la placa y más cantidad de mi antígeno tengo en la muestra es decir es un Elisa inverso a mayor cantidad de color menor con concentración del antígeno en mi muestra problema a continuación vamos a ver un ejemplo práctico del Elisa and sandwich que es el más común que se utiliza de Esta técnica en inmunología el primer paso de Esta técnica consiste en tapizar la placa en la que vamos a detectar eh nuestro antígeno con el primer anticuerpo en este caso vamos a utilizar como primer anticuerpo un anticuerpo que reconoce el factor de necrosis tumoral que es un factor relacionado con inflamación de este factor se utiliza una dilución eh concreta que eh eh va a formar parte esta de esta solución de el primer anticuerpo esta solución es una solución en pbs eh a un pH determinado dependiendo del tipo de anticuerpo se utiliza un pH una vez que tenemos preparada nuestra solución se utiliza para recubrir con ella los pocillos en los que luego vamos a eh poner nuestra muestra para que la unión del primer anticuerpo sea lo más eficiente posible a la placa esta se guarda a 4 grados se mantiene la unión durante durante toda la noche a 4 gr a la mañana siguiente lo que hacemos Es eliminar el exceso de el primer anticuerpo que no se ha pegado a la placa eh mediante dos lavados Entonces lo primero eliminamos enérgicamente tiramos enérgicamente eh la solución y a continuación hacemos los lavados para llevar para cabo los lavados vamos a utilizar una solución salina pbs junto con un detergente de esa manera nos aseguramos que se elimina todo el exceso de anticuerpo que no sea pegado a la placa dependiendo del número de filas y columnas pues utilizamos el número adecuado de indicado en el en el lector de Lisa en nuestro caso son eh ocho columnas entonces ah después de realizar los dos lavados para eliminar el exceso del anticuerpo primario eliminaremos el exceso de solución de lavado y eh procederemos a Añadir la solución de bloqueo con la solución de bloqueo lo que vamos a hacer es eh tapizar aquellos sitios en los que el primer anticuerpo no se ha llegado a unir para evitar que cuando echemos nuestra muestra pueda haber uniones inespecíficas la solución de bloqueo es una mezcla de solución de pbs con suero bobin fetal con suero que va a bloquearnos todas las uniones no específicas el bloqueo se realiza durante 2 horas a temperatura ambiente a continuación eliminaremos la solución de bloqueo y sin lavar añadiremos nuestra muestra donde van los antígenos problema y nuestra curva estándar después del bloqueo vamos a Añadir nuestra muestra problema aquí tenemos diferentes soluciones de en la que puede haber diferentes concentraciones de nuestro antígeno entonces procedemos a rellenar los pocillos normalmente por duplicado y el antígeno que está presente en nuestra muestra se unirá de manera específica al anticuerpo que estaba previamente pegado a la placa para saber la concentración que vamos a tener de nuestro antígeno en la muestra utilizamos una curva patrón en la que hemos ido poniendo en solución de bloqueo una cantidad conocida del antígeno por ejemplo en nuestro caso utilizamos una dilución que va desde 10 nanogramos milil hasta 0 10 5 2,5 1,25 0.6 0.3 0.15 nanogramos milr hasta con la que también vamos rellenando la placa por duplicado una vez que nuestra placa está rellena con la muestra problema y con la solución estándar la incubación se realiza a 4 gr durante 12 horas después de la incubación a la mañana siguiente tiraremos el exceso demuestra que no se ha unido al primer anticuerpo que no se ha unido a la placa y lavaremos durante cuatro veces a continuación vamos a Añadir el anticuerpo secundario que se va a unir a el antígeno que estaba presente en las muestras y que se va a unir también al antígeno de concentración conocida de la curva estándar la incubación con el anticuerpo secundario se realiza durante una hora a temperatura ambiente después de haber elimin el anticuerpo secundario que iba unido a una enzima y haber realizado seis lavados lo que hacemos es utilizar el sustrato que va a reaccionar con la enzima y me va a dar una reacción colorimétrica dependiendo la intensidad de color de la cantidad de antígeno que yo tenía en mi muestra el desarrollo del color como va a depender de la cantidad de antígeno que haya en la muestra puede tardar un tiempo Que es variable lo que hacemos Es guardar hacer la incubación a temperatura ambiente pero en oscuridad el tiempo en el que se realiza la incubación con el sustrato dependerá en cada caso de la cantidad de antígeno entonces lo que se hace Es que se va mirando hasta que veamos que se ha desarrollado finalmente el color de una manera gradual así podemos ver en este ejemplo como tenemos más color en esta parte porque tenemos más cantidad de antígeno y como gradualmente va desapareciendo el color donde tenemos menos cantidad de antígeno la última parte del protocolo consiste en eh ver Qué cantidad de proteína Qué cantidad de antígeno teníamos en cada una de nuestras muestras para ello lo que hacemos Es que el el desarrollo colorimétrico la intensidad de color la vamos a medir en un aparato a una determinada longitud de onda por la que es detectable este color Este es un espectr fotómetro y después de agitar las muestras realizaremos la ura y tras unos segundos nos aparecerán los valores en este cuadro los resultados numéricos que obtenemos después de la lectura del espectrofotómetro lo que nos indican son medidas de absorbancia o densidad óptica que están relacionadas directamente con la intensidad de color a mayor color mayor valor de densidad óptica a menor intensidad de color menor valor de intensidad óptica que nos estará indicando menor concentración de antígeno en nuestra muestra una vez tenemos estos valores lo que hacemos Es generar nuestra curva estándar en la cual sabíamos las concentraciones teníamos concentraciones conocidas de nuestro antígeno y eh podemos saber a cada concentración de antígeno la densidad óptica que le corresponde una vez tengamos eh nuestra gráfica podremos extrapolar los valores de absorbancia de nuestra muestra problema y conocer así el valor de concentración que le corresponde a cada punto i .
Déroulement de la vidéo:
1.5 [Música]
1.5 Soy Elena González Rey trabajo en el
1.5 instituto de parasitología y biomedicina
1.5 López neira que se encuentra en el
1.5 parque tecnológico el campus de la salud
1.5 de granada y mi área de especialidad yo
1.5 trabajo en el campo de la inmunología y
1.5 en concreto en en el campo de la
1.5 neuroinmunología en este vídeo os voy a
1.5 hablar sobre la técnica Elisa que son
1.5 las siglas en inglés del en immuno
1.5 absorbent ass o en español ensayo de
1.5 inmunoabsorción ligado a enzima que es
1.5 una técnica bioquímica que nos permite
1.5 cuantificar e identificar eh
1.5 determinadas moléculas sustancias como
1.5 proteínas hormonas factores de
1.5 crecimiento en distinto tipo de
1.5 soluciones como puede ser en sangre en
1.5 orina en extractos de tejidos Incluso en
1.5 en cultivos celulares Esta técnica eh se
1.5 desarrolla en los años 70 principalmente
1.5 para sustituir a otras técnicas tóxicas
1.5 que utilizaban radioactividad es una
1.5 técnica ampliamente utizar inmunología
1.5 principalmente cuando queremos
1.5 identificar o detectar un determinado eh
1.5 elemento que produce una infección si
1.5 esa infección es bacteriana o es vírica
1.5 por ejemplo se utiliza para saber qué
1.5 tipo de infección con el virus del SIDA
1.5 se tiene o para detectar la ausencia o
1.5 presencia de una determinada hormona
1.5 Pues bien la base de Esta técnica
1.5 consiste en eh que la solución en la que
1.5 tenemos eh la molécula problema eh vamos
1.5 a eh vamos a intentar eh inmovilizarla
1.5 en una superficie en un sustrato en una
1.5 placa esta placa tiene un material que
1.5 es poliestireno y lo que vamos a hacer
1.5 es detectarla con otras moléculas
1.5 moléculas que son específicas de esta
1.5 molécula problema la molécula problema
1.5 la vamos a llamar antígeno y la molécula
1.5 que detecta sería el anticuerpo los
1.5 anticuerpos eh van a reconocer
1.5 determinadas eh estructuras dentro del
1.5 antígeno hay dos tipos fundamentales de
1.5 anticuerpos anticuerpos monoclonales que
1.5 reconocen una sola estructura o epítopo
1.5 dentro de del antígeno y hay otros
1.5 anticuerpos que son policlonales los
1.5 anticuerpos policlonales son una mezcla
1.5 de anticuerpos que son capaces de
1.5 reconocer diferentes estructuras o
1.5 epítopos dentro del mismo
1.5 antígeno existen cuatro tipos
1.5 fundamentales de Elisa que son el Elisa
1.5 un Elisa directo un Elisa indirecto un
1.5 Elisa eh tipo sándwich y Elisa
1.5 competitivo los más utilizados en la
1.5 actualidad son el tipo indirecto y el
1.5 tipo sándwich en el Elisa directo lo que
1.5 hacemos Es esta placa de poliestireno la
1.5 cubrimos con la solución del antígeno y
1.5 utilizamos el anticuerpo eh para
1.5 detectar el antígeno normalmente los
1.5 anticuerpos van a ir Unidos a unas
1.5 enzimas porque es una reacción
1.5 enzimática y posteriormente le vamos a
1.5 Añadir un sustrato que tiene un color
1.5 cuando la enzima reacciona con el
1.5 sustrato el color cambia el color del
1.5 sustrato y nos da un color diferente que
1.5 puede ser detectado mediante una
1.5 determinada longitud de onda por un
1.5 aparato que es el espectr fotómetro
1.5 Cuanto más cantidad Cuanto más
1.5 intensidad de color tenemos significa
1.5 que tenemos más antígeno en la muestra y
1.5 lo que hacemos Es utilizando una curva
1.5 patrón estándar en la cual tenemos
1.5 cantidades conocidas de nuestro antígeno
1.5 saber a través del color Qué cantidad
1.5 tendríamos de antígeno en nuestra
1.5 muestra así en el Elisa directo es un
1.5 método rápido y sencillo Porque la unión
1.5 de la enzima va directa eh va
1.5 directamente Unido al anticuerpo en el
1.5 ensayo indirecto de nuevo e la placa
1.5 utilizaremos la solución para cubrir eh
1.5 los distintos pocillos con nuestra
1.5 mezcla de antígenos y la utilización
1.5 utilizaremos un primer anticuerpo que va
1.5 a detectar el antígeno de manera
1.5 específica y un segundo anticuerpo que
1.5 es el que lleva la enzima este segundo
1.5 anticuerpo se unirá al primer anticuerpo
1.5 va a reconocer al primer anticuerpo no
1.5 al antígeno posteriormente añadiremos el
1.5 sustrato y la enzima eh del segundo
1.5 anticuerpo desarrollará un color la
1.5 intensidad de color será directamente
1.5 proporcional a la cantidad de antígeno
1.5 que teníamos en la muestra este método
1.5 tiene la ventaja de que es más sensible
1.5 que el método directo luego T íamos un
1.5 ensayo en sándwich un Elisa sándwich en
1.5 el Elisa en sándwich lo que hacemos Es
1.5 tapizar la placa no con el antígeno sino
1.5 con un primer anticuerpo a continuación
1.5 después de realizar los lavados
1.5 oportunos utilizamos la mezcla de la
1.5 solución en la que queremos detectar el
1.5 antígeno con lo cual el antígeno va a
1.5 quedar inmovilizado a través de la unión
1.5 al primer anticuerpo que a su vez se
1.5 encuentra unido a la placa a
1.5 continuación también después de lavar el
1.5 exceso de solución O de antígeno que no
1.5 se ha pegado utilizaremos un segundo
1.5 anticuerpo que se va a unir directamente
1.5 también al antígeno de tal manera que
1.5 tendríamos el antígeno Unido por un lado
1.5 por el primer anticuerpo que está pegado
1.5 a la placa y por el segundo anticuerpo
1.5 este segundo anticuerpo es el que tiene
1.5 la enzima y cuando añadimos el sustrato
1.5 es el que va a desarrollar el color este
1.5 método es mucho más específico Además de
1.5 que tiene también una alta sensibilidad
1.5 y hay una amplificación también muy
1.5 importante de la señal a detectar Por
1.5 último el helisa competitivo es un
1.5 helisa que se utiliza mucho también
1.5 cuando la estructura del antígeno es
1.5 complicada Y tenemos epítopos o eh zonas
1.5 del an que son difíciles de detectar y
1.5 también cuando tenemos muy muy poca
1.5 cantidad de este antígeno lo que hacemos
1.5 en este caso es que la placa se tapiza o
1.5 se cubre con una cantidad conocida de
1.5 antígeno y nosotros utilizamos la
1.5 solución con nuestro antígeno problema
1.5 cuando añadimos el primer anticuerpo la
1.5 el anticuerpo se va a poder unir o al
1.5 antígeno que está en la placa o al
1.5 antígeno que está en solución como
1.5 posteriormente vamos a lavar todo el
1.5 antígeno que se una todo el anticuerpo
1.5 que se una al antígeno que está en
1.5 solución será eliminado de la placa de
1.5 tal manera que cuando se desarrolle el
1.5 color Cuanto más color tenga es decir
1.5 Cuanto más anticuerpo se haya Unido al
1.5 antígeno de la placa significa que tenía
1.5 menos antígeno en solución es decir
1.5 tenía menos antígeno En mi en mi muestra
1.5 problema cuanto menos color tenga
1.5 significa que más anticuerpo se unió al
1.5 antígeno que estaba en solución por lo
1.5 tanto menos se unió al que estaba en la
1.5 placa y más cantidad de mi antígeno
1.5 tengo en la muestra es decir es un Elisa
1.5 inverso a mayor cantidad de color menor
1.5 con concentración del antígeno en mi
1.5 muestra problema a continuación vamos a
1.5 ver un ejemplo práctico del Elisa and
1.5 sandwich que es el más común que se
1.5 utiliza de Esta técnica en inmunología
1.5 el primer paso de Esta técnica consiste
1.5 en tapizar la placa en la que vamos a
1.5 detectar eh nuestro antígeno con el
1.5 primer anticuerpo en este caso vamos a
1.5 utilizar como primer anticuerpo un
1.5 anticuerpo que reconoce el factor de
1.5 necrosis tumoral que es un factor
1.5 relacionado con inflamación de este
1.5 factor se utiliza una dilución eh
1.5 concreta que eh eh va a formar parte
1.5 esta de esta solución de el primer
1.5 anticuerpo esta solución es una solución
1.5 en pbs eh a un pH determinado
1.5 dependiendo del tipo de anticuerpo se
1.5 utiliza un
1.5 pH una vez que tenemos preparada nuestra
1.5 solución se utiliza para recubrir con
1.5 ella los pocillos en los que luego vamos
1.5 a
1.5 eh poner nuestra muestra
1.5 para que la unión del primer anticuerpo
1.5 sea lo más eficiente posible a la placa
1.5 esta se guarda a 4 grados se mantiene la
1.5 unión durante durante toda la noche a 4
1.5 gr a la mañana siguiente lo que hacemos
1.5 Es eliminar el exceso de el primer
1.5 anticuerpo que no se ha pegado a la
1.5 placa eh mediante dos lavados Entonces
1.5 lo primero eliminamos enérgicamente
1.5 tiramos enérgicamente eh la solución y a
1.5 continuación hacemos los
1.5 lavados para llevar para cabo los
1.5 lavados vamos a utilizar una solución
1.5 salina pbs junto con un detergente de
1.5 esa manera nos aseguramos que se elimina
1.5 todo el exceso de anticuerpo que no sea
1.5 pegado a la placa dependiendo del número
1.5 de filas y columnas pues utilizamos el
1.5 número adecuado de indicado en el en el
1.5 lector de Lisa en nuestro caso son eh
1.5 ocho columnas
1.5 entonces ah
1.5 después de realizar los dos lavados para
1.5 eliminar el exceso del anticuerpo
1.5 primario eliminaremos el exceso de
1.5 solución de lavado y eh procederemos a
1.5 Añadir la solución de
1.5 bloqueo con la solución de bloqueo lo
1.5 que vamos a hacer es eh tapizar aquellos
1.5 sitios en los que el primer anticuerpo
1.5 no se ha llegado a unir para evitar que
1.5 cuando echemos nuestra muestra pueda
1.5 haber uniones
1.5 inespecíficas la solución de bloqueo es
1.5 una mezcla de solución de pbs con suero
1.5 bobin fetal con suero que va a
1.5 bloquearnos todas las uniones no
1.5 específicas el bloqueo se realiza
1.5 durante 2 horas a temperatura
1.5 ambiente a continuación eliminaremos la
1.5 solución de bloqueo y sin lavar
1.5 añadiremos nuestra muestra donde van los
1.5 antígenos problema y nuestra curva
1.5 estándar después del bloqueo vamos a
1.5 Añadir nuestra muestra problema aquí
1.5 tenemos diferentes
1.5 soluciones de en la que puede haber
1.5 diferentes concentraciones de nuestro
1.5 antígeno entonces procedemos
1.5 a rellenar los
1.5 pocillos normalmente por
1.5 duplicado y el antígeno que está
1.5 presente en nuestra muestra se unirá de
1.5 manera específica al anticuerpo que
1.5 estaba previamente pegado a la
1.5 placa para saber la concentración que
1.5 vamos a tener de nuestro antígeno en la
1.5 muestra utilizamos una curva patrón en
1.5 la que hemos ido poniendo en solución de
1.5 bloqueo una cantidad conocida del
1.5 antígeno por ejemplo en nuestro caso
1.5 utilizamos una dilución que va desde 10
1.5 nanogramos milil hasta 0 10 5 2,5 1,25
1.5 0.6 0.3 0.15 nanogramos milr hasta
1.5 con la que también vamos rellenando la
1.5 placa por duplicado
1.5 una vez que nuestra placa está rellena
1.5 con la muestra problema y con la
1.5 solución estándar la incubación se
1.5 realiza a 4 gr durante 12
1.5 horas después de la incubación a la
1.5 mañana siguiente tiraremos el exceso
1.5 demuestra que no se ha unido al primer
1.5 anticuerpo que no se ha unido a la placa
1.5 y lavaremos durante cuatro veces
1.5 a continuación vamos a Añadir el
1.5 anticuerpo secundario que se va a unir a
1.5 el antígeno que estaba presente en las
1.5 muestras y que se va a unir también al
1.5 antígeno de concentración conocida de la
1.5 curva
1.5 estándar la incubación con el anticuerpo
1.5 secundario se realiza durante una hora a
1.5 temperatura
1.5 ambiente después de haber elimin
1.5 el anticuerpo secundario que iba unido a
1.5 una enzima y haber realizado seis
1.5 lavados lo que hacemos es utilizar el
1.5 sustrato que va a reaccionar con la
1.5 enzima y me va a dar una reacción
1.5 colorimétrica dependiendo la intensidad
1.5 de color de la cantidad de antígeno que
1.5 yo tenía en mi
1.5 muestra el desarrollo del color como va
1.5 a depender de la cantidad de antígeno
1.5 que haya en la muestra puede tardar un
1.5 tiempo Que es variable lo que hacemos Es
1.5 guardar hacer la incubación a
1.5 temperatura ambiente pero en
1.5 oscuridad el tiempo en el que se realiza
1.5 la incubación con el sustrato dependerá
1.5 en cada caso de la cantidad de antígeno
1.5 entonces lo que se hace Es que se va
1.5 mirando hasta que veamos que se ha
1.5 desarrollado finalmente el color de una
1.5 manera gradual así podemos ver en este
1.5 ejemplo como tenemos más color en esta
1.5 parte porque tenemos más cantidad de
1.5 antígeno y como gradualmente va
1.5 desapareciendo el color donde tenemos
1.5 menos cantidad de
1.5 antígeno la última parte del protocolo
1.5 consiste en eh ver Qué cantidad de
1.5 proteína Qué cantidad de antígeno
1.5 teníamos en cada una de nuestras
1.5 muestras para ello lo que hacemos Es que
1.5 el el desarrollo colorimétrico la
1.5 intensidad de color la vamos a medir en
1.5 un aparato a una determinada longitud de
1.5 onda por la que es detectable este color
1.5 Este es un espectr
1.5 fotómetro y después de agitar las
1.5 muestras realizaremos la
1.5 ura y tras unos segundos nos aparecerán
1.5 los valores en este cuadro los
1.5 resultados numéricos que obtenemos
1.5 después de la lectura del
1.5 espectrofotómetro lo que nos indican son
1.5 medidas de absorbancia o densidad óptica
1.5 que están relacionadas directamente con
1.5 la intensidad de color a mayor color
1.5 mayor valor de densidad óptica a menor
1.5 intensidad de color menor valor de
1.5 intensidad óptica que nos estará
1.5 indicando menor concentración de
1.5 antígeno en nuestra muestra una vez
1.5 tenemos estos valores lo que hacemos Es
1.5 generar nuestra curva estándar en la
1.5 cual sabíamos las concentraciones
1.5 teníamos concentraciones conocidas de
1.5 nuestro antígeno y eh podemos saber a
1.5 cada concentración de antígeno la
1.5 densidad óptica que le corresponde una
1.5 vez tengamos eh nuestra gráfica podremos
1.5 extrapolar los valores de absorbancia de
1.5 nuestra muestra problema y conocer
1.5 así el valor de concentración que le
1.5 corresponde a cada punto i
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